TRIzol有无毒性,经呼吸道吸入有何影响?
TRIzol有毒性,trizol中含有苯酚,苯酚是 *** 性气味。对呼吸道有伤害,闻久了会有晕的感觉。
1、TRIZOL的主要成分是苯酚。苯酚的主要作用是裂解细胞,使细胞中的蛋白,核酸物质解聚得到释放。
2、苯酚虽可有效地变性蛋白质,但不能完全抑制RNA酶活性,因此TRIzol中还加入了8-羟基喹啉、异硫氰酸胍、β-巯基乙醇等来抑制内源和外源RNase(RNA酶)。
扩展资料:
使用TRIzol的注意事项:
trizol法提取rna原理是什么?
Trizol作用原理:
在匀质化或溶解样品中,Trizol试剂可保持RNA的完整性,同时能破坏细胞及溶解细胞成分。加入氯仿离心后,裂解液分层成水相和有机相。RNA存在于水相中。
水相转移后,RNA通过异丙醇沉淀回收。移去水相后,用乙醇可从中间相沉淀得到DNA,加入异丙醇沉淀可从有机相得到蛋白质。
扩展资料
RNA和DNA一样,也是由各种核苷酸通过3′,5′-磷酸二酯键连接构成的多核苷酸链,但与DNA有一系列差异。
1、在化学组成方面,RNA含核糖而不含脱氧核糖。含尿嘧啶而不含胸腺密啶。例外的是,每个tNA分子含有一个胸腺嘧啶,这是在RNA链合成后由尿嘧啶甲基化生的,此外,前面已提到,少数DNA含有少量核糖,但这些个别的例外并不能以此否定两类核酸组成上的差异。
2、RNA一级结构的概念虽与DNA相同.但其基本结构单位是核糖核苷酸而不是脱氧核糖核苷酸。此外,部分RNA5′端或3′端有特殊的核苷酸序列,而且RNA一级结构中没有DNA那样复杂的顺序组织。
3、绝大多数RNA为单链分子,单链可自身折迭形成发夹(hairpin)样结构而有局部双螺旋结构的特征,这是各种RAN空间结构的共同特征。RNA局部双螺旋结构中碱基互补配对规律是A对U和G对C。由于RNA分子内部不能全面形成碱基配对,故其碱基克分子比A不等于U,G不等于C,不存在DNA碱基比例的 Chargaff规律。
trizol法提取rna原理 步骤,rna提取trizol
1.trizol法提取rna原理:在匀质化或溶解样品中,Trizol试剂可保持RNA的完整性,同时能破坏细胞及溶解细胞成分。
2.加入氯仿离心后,裂解液分层成水相和有机相。
3.RNA存在于水相中。
4.水相转移后,RNA通过异丙醇沉淀回收。
5.移去水相后,用乙醇可从中间相沉淀得到DNA,加入异丙醇沉淀可从有机相得到蛋白质。
6.Trizol是一种总RNA抽提试剂,内含异硫氰酸胍等物质,能迅速裂解细胞,抑制细胞释放出的核酸酶活性。
7.目前常用Trizol法进行提取组织或细胞中的RNA。
8.RNA的碱基配对规则基本和DNA相同,不过除了A-U、G-C配对外,G-U也可以配对。
9.在细胞中,根据结构功能的不同,RNA主要分三类,即tRNA(转运RNA),rRNA(核糖体RNA),mRNA(信使RNA)。
10.mRNA是合成蛋白质的模板,内容按照细胞核中的DNA所转录。
11.tRNA是mRNA上碱基序列(即遗传密码子)的识别者和氨基酸的转运者。
12.rRNA是组成核糖体的组分,是蛋白质合成的工作场所。
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配制溶液(solution I):125g guanidinium thiocyanate异硫氰酸胍, 146.5mL 三蒸水,65摄氏度加热搅拌溶解。
配制 Trizol
10mL. solution I
352uL. 0.75mol/L pH7.0 sodium citrite柠檬酸钠pH7.0
528uL. 10% N-laurosylsarcosine(Sarkosyl)N- 十二烷基肌氨酸钠
76uL. 2-mercaptoethanol 2-巯基乙醇
1.09mL 2mol/L sodium acetate(pH 4.0). 醋酸钠或者乙酸钠
10.9mL. Water-saturated phenol水饱和苯酚
0.02g 8-羟基喹啉(终浓度0.1%)
RNAplus和Trizol有什么区别
1、Trizol试剂在破碎和溶解细胞时能保持样品中RNA的完整性,有效抑制RNA的降解,而RNAplus破碎后不能维持RNA的完整性。
2、试剂中的DNA和蛋白是以沉淀的方式还原,而RNAplus试剂中,DNA与蛋白的还原是依靠化学药物还原。